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                  48T人細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1ELISA檢測試劑盒的說明書

                  發(fā)布時(shí)間: 2012-11-02  點(diǎn)擊次數(shù): 900次

                  上海研域網(wǎng)絡(luò)有限公司專業(yè)供應(yīng)各種屬ELISA試劑盒,金標(biāo)試劑盒,細(xì)胞株,抗體,生物試劑,生物耗材,食品檢測試劑盒,放免試劑盒,胎牛血清,提供免費(fèi)代測服務(wù),保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果客觀真實(shí)性。

                  人細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1ELISA檢測試劑盒

                  試驗(yàn)原理:
                     ECM-1試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知ECM-1濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測。先將ECM-1和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中ECM-1的濃度呈比例關(guān)系。

                  自備材料:

                  蒸餾水。
                  加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。
                  振蕩器及磁力攪拌器等。

                  樣品收集、處理及保存方法:

                  血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
                    
                  血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
                  細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘除顆粒和聚合物。
                  組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
                  保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

                  人細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1ELISA檢測試劑盒

                  操作注意事項(xiàng):

                  試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
                  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
                  不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
                  使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
                  使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
                  底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
                  加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
                  按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

                  人細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1ELISA檢測試劑盒

                  安全性:

                  避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。
                  實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。
                  不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。


                  試劑盒性能:

                  1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
                  2. 特異性:不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
                  3. 重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。

                    
                  操作步驟:

                  使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,產(chǎn)生加樣上的誤差。
                  根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
                  加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育45分鐘。
                  甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
                  每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
                  甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機(jī)洗滌,洗滌次數(shù)增加一次。
                  每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育5分鐘。避免光照。
                  取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
                  在450nm波長處測定各孔的OD值。

                  人細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1ELISA檢測試劑盒

                  結(jié) 果 判 斷 與 分 析:

                  1、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
                  2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),相應(yīng)的ECM-1標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),做得相應(yīng)的曲線,樣品的ECM-1含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度, 再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。
                  3、檢測值范圍:0-80ng/ml
                  4、敏感度: 0.1 ng/ml

                  Rabbit anti-guinea pig IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記兔抗豚鼠IgM 0.3ml
                  Rabbit anti-bov IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記兔抗牛IgG 0.3ml
                  Rabbit anti-bov IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記兔抗牛IgM 0.3ml
                  Rabbit anti-chi IgM/RBITC 羅丹明標(biāo)記兔抗雞IgM 0.3ml
                  HCFHrp/BTA(Bladdertumor antigen)human 膀胱腫瘤抗原抗體 0.2ml
                  HCN4(Hyperpolarization activated Cyclic Nucleotide-gated channel 4) 環(huán)化核苷酸調(diào)控陽離子通道蛋白亞型4 0.2ml
                  HCV-Core 丙型肝炎病毒-C區(qū)抗體 0.1ml
                  HCV-HCBP1/ACY-3(Hepatitis C viruscore- binding protein 1) 丙型肝炎病毒核心蛋白結(jié)合蛋白-1抗體 0.2ml

                  若需要了解試劑盒的詳細(xì)信息,詳情:謝明: 


                   

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