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                  植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶聯(lián)免疫分析

                  發(fā)布時間: 2014/12/17  點擊次數(shù): 664次
                  提 供 商: 研域(上海)化學試劑有限公司 資料大小:
                  圖片類型: 下載次數(shù): 165
                  資料類型: DOC 瀏覽次數(shù): 664
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                  植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶聯(lián)免疫分析使用目的:本試劑盒用于測定植物組織,細胞及其它相關樣本中苯丙氨酸解氨酶(PAL)含量。
                  實驗原理
                  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)水平。用純化的植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入苯丙氨酸解氨酶(PAL),再與HRP標記的植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的苯丙氨酸解氨酶(PAL)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)濃度。 
                  植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶聯(lián)免疫分析標本要求 
                  1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
                  2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
                  植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶聯(lián)免疫分析操作步驟
                  1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
                  2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
                  3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
                  4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
                  5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
                  6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
                  7.溫育:操作同3。
                  8.洗滌:操作同5。
                  9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
                  10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉)。
                  11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
                  計算
                    以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實際濃度。 
                  注意事項
                  1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
                  2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

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